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          培養基的制備、貯存及質量控制方法!

          2021-06-19

          培養基可按處方配制,也可使用按處方生產的符合規定的脫水培養基。



          在制備培養基時,應選擇質量符合要求的脫水培養基或單獨配方組分進行配制。脫水培養基應附有處方和使用說明,配制時應按使用說明上的要求操作以確保培養基的質量符合要求,不得使用結塊或顏色發生改變的脫水培養基。脫水培養基或單獨配方組分應在適當的條件下儲存,如低溫、干燥和避光,所有的容器應密封,尤其是盛放脫水培養基的容器。商品化的成品培養基除了應附有處方和使用說明外,還應注明有效期、貯存條件、適用性檢查試驗的質控菌和用途。

           


          為保證培養基質量的穩定可靠,各脫水培養基或各配方組分應準確稱量,并要求有一定的準確度。配制培養基Z常用的溶劑是純化水,特殊情況下,可能需要用去離子水和蒸餾水。應記錄各稱量物的重量和水的使用量。配制培養基所用容器和配套器具應潔凈,可用純化水沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來物質的殘留。對熱敏感的培養基如糖發酵培養基其分裝容器一般應預先進行滅菌,以保證培養基的無菌性。  


           

          脫水型培養基應完全溶解于水中,再行分裝與滅菌。配制時若需要加熱助溶,應注意不要過度加熱,以避免培養基顏色變深。如需要添加其它組分時,加入后應充分混勻。

           


          應按照生產商提供或使用者驗證的參數進行培養基的滅菌。商品化的成品培養基必須附有所用滅菌方法的資料。培養基滅菌一般采用濕熱滅菌技術,特殊培養基可采用薄膜過濾除菌。



          培養基若采用不適當的加熱和滅菌條件,有可能引起顏色變化、透明度降低、瓊脂凝固力或 pH 的改變。因此,培養基應采用驗證的滅菌程序滅菌,培養基滅菌方法和條件,應通過無菌性試驗和促生長試驗進行驗證。此外,對高壓滅菌器的蒸汽循環系統也要加以驗證,以保證在一定裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導致培養基的過熱,過度滅菌可能會破壞絕大多數的細菌和真菌培養基促生長的質量。滅菌器中培養基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此,應根據滅菌培養基的特性,進行全面的滅菌程序驗證。,



          應確定每批培養基滅菌后的 pH(冷卻至室溫 25℃測定)。若培養基處方中列出 pH 的范圍,除非經驗證表明培養基的 pH 允許的變化范圍很寬,否則,pH的范圍不能超過規定的±0.2。


          制成平板或分裝于試管的培養基應進行下列檢查:容器和蓋子不得破裂,裝量應相同,盡量避免形成氣泡,固體培養基表面不得產生裂縫或漣漪,在冷藏溫度下不得形成結晶,不得污染微生物等。應檢查和記錄批數量、有效期及培養基的無菌檢查。



          培養基的貯存



          自配的培養基應標記名稱、批號、配制日期等信息,并在已驗證的條件下貯藏。商品化的成品培養基標簽上應標有名稱、批號、生產日期、失效期及培養基的有關特性,生產商和使用者應根據培養基使用說明書上的要求進行保存,所采用的保藏和運輸條件應使成品培養基較低限度的失去水分并提供機械保護。



          培養基滅菌后若儲藏在高壓滅菌器中,質量可能會受影響,一般不提倡這種存放法。瓊脂培養基不得在 0℃或 0℃以下存放,因為冷凍可能破壞凝膠特性。



          培養基應避光保存,若要長期保存,應置于密閉容器中以防止水分流失。瓊脂平板較好現配現用,如置冰箱保存,一般不超過一周,且應密閉包裝,若延長保存,保存期需經驗證確定。



          固體培養基滅菌后的再融化只允許一次,以避免因過度受熱造成培養基質量下降或微生物污染。培養基的再融化一般采用的水浴加熱或流通蒸汽。若使用微波爐,應避免培養基過度受熱及水分的蒸發,更要注意安全。融化的培養基應置于 45~50℃的水浴中,不得超過 8 小時。傾注培養基時,應擦干培養基容器外表面的水分,避免容器外壁的水滴進入培養基中造成污染。



          實驗室配制或商品化的成品培養基的質量依賴于其制備過程,采用不適宜方法制備的培養基將影響微生物的生長或復蘇,從而影響試驗結果的可靠性。

           


          配制好的培養基應定期進行質量控制試驗。實驗室配制的培養基的常規監控項目是 pH,適用性檢查試驗,定期的穩定性檢查以確定有效期。培養基在有效期內應依據適用性檢查試驗確定培養基質量是否符合要求。有效期的長短將取決于在一定存放條件下(包括容器特性及密封性)的培養基其組成成分的穩定性。



          在實驗室中,若采用已驗證的配制和滅菌程序制備培養基且過程受控,那么同一批脫水培養基的適用性檢查試驗可只進行一次,試驗的菌種可根據培養基的用途從相關附錄中進行選擇,也可增加從生產環境及產品中常見的污染菌株。培養基的質量控制試驗若不符合規定,應尋找不合格的原因,以防止問題重復出現。任何不符合要求的培養基均不能使用。

           


          用于環境監控的培養基須特別防護。用于關鍵區域監控的培養基較好要雙層包裝和終端滅菌,如果不能采用終端滅菌的培養基,那么在使用前應進行100%的預培養以防止外來的污染物帶到環境中及避免出現假陽性結果。


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